Resumo:

Introdução: Apesar dos avanços e desenvolvimento da ciência e tecnologia na área da saúde, a incidência e mortalidade por câncer continuam aumentando, consistindo em um dos maiores problemas de saúde pública. Sendo assim, os Adutos de Morita-Baylis-Hillman vêm ganhando destaque nas pesquisas farmacológicas por apresentarem diversos efeitos biológicos promissores no tratamento do câncer. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do AMBH: A2CN em células de câncer de mama triplo-negativo (4T1), nas respostas relacionadas a invasão celular. Além de verificar se os efeitos estariam relacionados com a modulação de canais de potássio ativados por cálcio de grande condutância (BKCa). Metodologia: Foram realizados experimentos para determinação da CI50 na linhagem 4T1 através do método de redução de MTT. Posteriormente, foram realizados ensaios de proliferação, migração, adesão e invasão celular para observar os efeitos celulares modulados pelo composto. Além disso, foi realizado registros eletrofisiológicos de correntes de potássio do tipo BKCa. Para isso, foi utilizada a técnica de patch-clamp no modo whole cell, em que após estabilidade do selo (>1GΩ) foram disparados pulsos despolarizantes de -60 mV a +80mV, com 15 segundos de intervalo. Resultados: Os resultados mostraram que, o composto após 72 h de tratamento apresentou CI50 igual a 28,8  2,3M, em 24 h o CI50 > 200M, apresentando efeito dose e tempo dependentes. A taxa de proliferação celular foi reduzida sendo que concentrações de 25, 12,5 e 6,25M o composto reduziu a proliferação em 98,7, 74,9 e 44,5% comparado ao controle não tratado. Na migração celular, o A2CN nas concentrações de 12,5 e 50M apresentou efeito inibitório no fechamento da ferida, após 16 h. Nos ensaios de adesão celular, A2CN à 50M, apresentou inibição da adesão de aproximadamente 25% e 20%, nas matrizes de laminina e fibronectina, respectivamente. Além disso, concentrações crescentes de A2CN demonstraram causar modificações morfológicas nas células. Utilizando um modelo tridimensional para avaliação de metástase in vitro, foi possível observar que o A2CN reduziu o processo de invasão celular. Ocorreu uma inibição da área invadida pelas células nas concentrações de 12,5, 25 e 50M correspondente a 70,8%, 93,2% e 98,5%, respectivamente. A amplitude de correntes de potássio foi medida na situação controle, bem como na presença de 100nM de Iberotoxina (IBX), 50µM de A2CN, e IBX mais A2CN. Na presença de IBX a amplitude de corrente de potássio (Ik) foi reduzida de 297,9 pA para 99,7 pA. Apresentando uma inibição de 61,27 ± 2,49% caracterizando como componente majoritário do registro de corrente de potássio do tipo BKCa. Na presença de 50µM de A2CN a inibição de corrente foi de 60,53 ± 5,04% quando comparados com o controle. Para avaliar se a redução da Ik na presença do A2CN está sendo mediada por BKca, foram obtidos registros de Ik com incubação de IBX mais A2CN e observou-se uma inibição de corrente de 67,6 ± 4,96%. Sendo assim, pode-se concluir que o A2CN apresentou atividade anticâncer e foi capaz de atuar de forma inibitória em processos celulares responsáveis pela malignificação da doença.