AVALIAÇÃO DA SENSIBILIDADE DOS ENSAIOS DE PCR DIRIGIDOS PARA MARCADORES MOLECULARES EM MISTURAS ARTIFICIAIS DE DIFERENTES POPULAÇÕES DO TRYPANOSOMA CRUZI

AVALIAÇÃO DA SENSIBILIDADE DOS ENSAIOS DE PCR DIRIGIDOS PARA MARCADORES MOLECULARES EM MISTURAS ARTIFICIAIS DE DIFERENTES POPULAÇÕES DO TRYPANOSOMA CRUZI

Pereira, Kênia T.; Valle, Ítalo F.; Macedo, Andréa M.; Bortoleto, Nayara D. A.; Valadares, Helder M. S.

Resumo:

A doença de Chagas é uma doença causada pelo parasito Trypanosoma cruzi que afeta cerca de 10 milhões de indivíduos na América Latina. Inúmeros estudos biológicos e moleculares revelaram uma grande variabilidade genética entre as cepas do T. cruzi, as quais foram divididas em seis Unidades Taxonômicas Discretas (DTUs) chamadas de T. cruzi I a T. cruzi VI. Pacientes chagásicos em áreas endêmicas podem ser infectados por múltiplos contatos com diferentes triatomíneos, e estes, por sua vez, podem se alimentar de diferentes indivíduos infectados propiciando a formação de populações multiclonais em hospedeiros e vetores. Uma vez que a identificação de populações multiclonais nos hospedeiros depende primariamente da sensibilidade dos ensaios de PCR, o objetivo deste trabalho foi investigar o grau de sensibilidade dos ensaios de PCR para diferentes marcadores moleculares, utilizando misturas artificiais de DNA obtido de cepas do T. cruzi pertencentes a diferentes linhagens filogenéticas. Assim, inicialmente, foram produzidas 27 misturas artificiais contendo DNA de Sílvio X10 cl1 (TcI) e CL Brener (TcVI), em percentuais que variaram de 99,9% Sílvio/0,1% CL Brener a 0,1% Sílvio/99,9% CL Brener e submetidas a ensaios de PCR para os marcadores rDNA 24Sα e Citocromo Oxidase II (COII). Resultados preliminares indicaram que houve uma maior sensibilidade para a detecção do DNA do T. cruzi I em comparação a T. cruzi VI utilizando o marcador rDNA 24Sα e que sua sensibilidade na PCR foi aproximadamente 16 vezes maior em relação ao COII. Os limites de detecção encontrados para rDNA 24Sα e COII foram 0,5 e 8% para Sílvio e 2 e 8% para CL Brener, respectivamente. Para confirmar estes resultados, experimentos adicionais serão realizados empregando outros marcadores e novas combinações de DNA de cepas do T. cruzi de diferentes linhagens filogenéticas.

A doença de Chagas é uma doença causada pelo parasito Trypanosoma cruzi que afeta cerca de 10 milhões de indivíduos na América Latina. Inúmeros estudos biológicos e moleculares revelaram uma grande variabilidade genética entre as cepas do T. cruzi, as quais foram divididas em seis Unidades Taxonômicas Discretas (DTUs) chamadas de T. cruzi I a T. cruzi VI. Pacientes chagásicos em áreas endêmicas podem ser infectados por múltiplos contatos com diferentes triatomíneos, e estes, por sua vez, podem se alimentar de diferentes indivíduos infectados propiciando a formação de populações multiclonais em hospedeiros e vetores. Uma vez que a identificação de populações multiclonais nos hospedeiros depende primariamente da sensibilidade dos ensaios de PCR, o objetivo deste trabalho foi investigar o grau de sensibilidade dos ensaios de PCR para diferentes marcadores moleculares, utilizando misturas artificiais de DNA obtido de cepas do T. cruzi pertencentes a diferentes linhagens filogenéticas. Assim, inicialmente, foram produzidas 27 misturas artificiais contendo DNA de Sílvio X10 cl1 (TcI) e CL Brener (TcVI), em percentuais que variaram de 99,9% Sílvio/0,1% CL Brener a 0,1% Sílvio/99,9% CL Brener e submetidas a ensaios de PCR para os marcadores rDNA 24Sα e Citocromo Oxidase II (COII). Resultados preliminares indicaram que houve uma maior sensibilidade para a detecção do DNA do T. cruzi I em comparação a T. cruzi VI utilizando o marcador rDNA 24Sα e que sua sensibilidade na PCR foi aproximadamente 16 vezes maior em relação ao COII. Os limites de detecção encontrados para rDNA 24Sα e COII foram 0,5 e 8% para Sílvio e 2 e 8% para CL Brener, respectivamente. Para confirmar estes resultados, experimentos adicionais serão realizados empregando outros marcadores e novas combinações de DNA de cepas do T. cruzi de diferentes linhagens filogenéticas.

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/biochem-jaibqi-0050

Como citar:

Pereira, Kênia T.; Valle, Ítalo F.; Macedo, Andréa M.; Bortoleto, Nayara D. A.; Valadares, Helder M. S.; "AVALIAÇÃO DA SENSIBILIDADE DOS ENSAIOS DE PCR DIRIGIDOS PARA MARCADORES MOLECULARES EM MISTURAS ARTIFICIAIS DE DIFERENTES POPULAÇÕES DO TRYPANOSOMA CRUZI", p-3-4. In: Anais da V Jornada Acadêmica Internacional de Bioquímica [= Blucher Biochemistry Proceedings, v.1, n.1]. São Paulo: Blucher, 2015.
ISSN 23595043, DOI 10.5151/biochem-jaibqi-0050