Resumo:

A doença de Chagas é uma doença causada pelo parasito Trypanosoma cruzi que afeta cerca de 10 milhões de indivíduos na América Latina. Inúmeros estudos biológicos e moleculares revelaram uma grande variabilidade genética entre as cepas do T. cruzi, as quais foram divididas em seis Unidades Taxonômicas Discretas (DTUs) chamadas de T. cruzi I a T. cruzi VI. Pacientes chagásicos em áreas endêmicas podem ser infectados por múltiplos contatos com diferentes triatomíneos, e estes, por sua vez, podem se alimentar de diferentes indivíduos infectados propiciando a formação de populações multiclonais em hospedeiros e vetores. Uma vez que a identificação de populações multiclonais nos hospedeiros depende primariamente da sensibilidade dos ensaios de PCR, o objetivo deste trabalho foi investigar o grau de sensibilidade dos ensaios de PCR para diferentes marcadores moleculares, utilizando misturas artificiais de DNA obtido de cepas do T. cruzi pertencentes a diferentes linhagens filogenéticas. Assim, inicialmente, foram produzidas 27 misturas artificiais contendo DNA de Sílvio X10 cl1 (TcI) e CL Brener (TcVI), em percentuais que variaram de 99,9% Sílvio/0,1% CL Brener a 0,1% Sílvio/99,9% CL Brener e submetidas a ensaios de PCR para os marcadores rDNA 24Sα e Citocromo Oxidase II (COII). Resultados preliminares indicaram que houve uma maior sensibilidade para a detecção do DNA do T. cruzi I em comparação a T. cruzi VI utilizando o marcador rDNA 24Sα e que sua sensibilidade na PCR foi aproximadamente 16 vezes maior em relação ao COII. Os limites de detecção encontrados para rDNA 24Sα e COII foram 0,5 e 8% para Sílvio e 2 e 8% para CL Brener, respectivamente. Para confirmar estes resultados, experimentos adicionais serão realizados empregando outros marcadores e novas combinações de DNA de cepas do T. cruzi de diferentes linhagens filogenéticas.