Horizontal Transfer of Vancomycin Resistance Gene From Enterococcus Sp. in Milk

Horizontal Transfer of Vancomycin Resistance Gene From Enterococcus Sp. in Milk

Maia, Luciana Furlaneto; Terra, Márcia Regina; Furlaneto, Márcia Cristina

Abstract:

A cadeia alimentar tem sido descrita como rota e difusão de micro-organismos resistentes a antibiótico. Dentre os micro-organismos destaca-se as espécies de Enterococcus, por apresentarem resistência intrínseca, mediada por genes localizados em cromossomos ou adquirida, mediada por genes presentes em plasmídeos e transposons. Neste estudo avaliamos a transferência do gene vanA entre isolados de E. faecium e E. faecalis, via processo conjugativo in vitro em leite reconstituído. Para tanto, foi traçado o perfil genotípico e fenotípico dos isolados doadores E. faecalis 802 e E. faecium 924 e receptores E. faecalis 848, 872 e 906. Como marcadores moleculares obtivemos os isolados doadores vanA+ tetL- gelE- cpd- e receptores vanA- tetL+ gelE+ cpd+. Todos os genes foram confirmados quanto a localização plasmídial ou cromossomal. O gene cpd codifica uma proteína denominada feromônio sexual expressa pelo receptor. A Concentração Inibitória Mínima para os antimicrobianos vancomicina e tetraciclina foi estabelecida segundo a metodologia de preconizada pelo CLSI. O processo de conjugação foi realizado em leite em pó reconstituído na razão de 1:1(doador: receptor), sob agitação de 80 rpm a 37ºC por 6 horas. A cada 2 horas, uma alíquota do co-cultivo foi retirado e semeado em meio MHA suplementado com tetraciclina (16Andamp;#956;g/mL) e vancomicina (32Andamp;#956;g/mL). Foi observado crescimento de colônias transconjugantes com todos os pares conjugativos e todos os tempos de co-cultivo, mesmo sendo o doador e receptor da mesma espécie e espécies diferentes. Os transconjugantes foram confirmados pela técnica de PCR para a presença dos genes eleitos como marcadores moleculares. Também foi realizado o processo de conjugação com doador morto, excluindo a possibilidade de transformação. A estabilidade plasmidial dos transconjugantes foi realizada por repiques celulares consecutivos em meio sem pressão seletiva finalizando com meio contendo os antibióticos tetraciclina e vancomicina. Cem por cento das colônias transconjugantes mantiveram o plasmídeo. Este trabalho mostrou a disseminação de genes de resistência entre isolados de Enterococcus sp, quando presente em alimento, o que pode acarretar em um aumento da frequência de Enterococcus spp. resistentes à vancomicina e outros antimicrobianos, dificultando ainda mais sua terapêutica. Apoio: Fundação Araucária e CNPq.

A cadeia alimentar tem sido descrita como rota e difusão de micro-organismos resistentes a antibiótico. Dentre os micro-organismos destaca-se as espécies de Enterococcus, por apresentarem resistência intrínseca, mediada por genes localizados em cromossomos ou adquirida, mediada por genes presentes em plasmídeos e transposons. Neste estudo avaliamos a transferência do gene vanA entre isolados de E. faecium e E. faecalis, via processo conjugativo in vitro em leite reconstituído. Para tanto, foi traçado o perfil genotípico e fenotípico dos isolados doadores E. faecalis 802 e E. faecium 924 e receptores E. faecalis 848, 872 e 906. Como marcadores moleculares obtivemos os isolados doadores vanA+ tetL- gelE- cpd- e receptores vanA- tetL+ gelE+ cpd+. Todos os genes foram confirmados quanto a localização plasmídial ou cromossomal. O gene cpd codifica uma proteína denominada feromônio sexual expressa pelo receptor. A Concentração Inibitória Mínima para os antimicrobianos vancomicina e tetraciclina foi estabelecida segundo a metodologia de preconizada pelo CLSI. O processo de conjugação foi realizado em leite em pó reconstituído na razão de 1:1(doador: receptor), sob agitação de 80 rpm a 37ºC por 6 horas. A cada 2 horas, uma alíquota do co-cultivo foi retirado e semeado em meio MHA suplementado com tetraciclina (16Andamp;#956;g/mL) e vancomicina (32Andamp;#956;g/mL). Foi observado crescimento de colônias transconjugantes com todos os pares conjugativos e todos os tempos de co-cultivo, mesmo sendo o doador e receptor da mesma espécie e espécies diferentes. Os transconjugantes foram confirmados pela técnica de PCR para a presença dos genes eleitos como marcadores moleculares. Também foi realizado o processo de conjugação com doador morto, excluindo a possibilidade de transformação. A estabilidade plasmidial dos transconjugantes foi realizada por repiques celulares consecutivos em meio sem pressão seletiva finalizando com meio contendo os antibióticos tetraciclina e vancomicina. Cem por cento das colônias transconjugantes mantiveram o plasmídeo. Este trabalho mostrou a disseminação de genes de resistência entre isolados de Enterococcus sp, quando presente em alimento, o que pode acarretar em um aumento da frequência de Enterococcus spp. resistentes à vancomicina e outros antimicrobianos, dificultando ainda mais sua terapêutica. Apoio: Fundação Araucária e CNPq.

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/foodsci-microal-101

Como citar:

Maia, Luciana Furlaneto; Terra, Márcia Regina; Furlaneto, Márcia Cristina; "Horizontal Transfer of Vancomycin Resistance Gene From Enterococcus Sp. in Milk", p-203-204. In: Proceedings of the XII Latin American Congress on Food Microbiology and Hygiene [=Blucher Food Science Proceedings, v.1, n.1]. São Paulo: Blucher, 2014.
ISSN 2359201X, DOI 10.5151/foodsci-microal-101