PRODUÇÃO E PURIFICAÇÃO DE UMA β-XILOSIDADE DO FUNGO CERATOCYSTIS FIMBRIATA

PRODUÇÃO E PURIFICAÇÃO DE UMA β-XILOSIDADE DO FUNGO CERATOCYSTIS FIMBRIATA

Martins, Marcele Pandeló

Resumo:

As β-xilosidases catalisam a hidrólise de xigooligossacarídeos através da remoção de unidades xilosil em sua região não redutora. Estas são enzimas de interesse biotecnológico, principalmente para produção do álcool combustível. Ceratocystis fimbriata é um fungo fitopatogênico causador doenças em diversas culturas. O objetivo deste trabalho foi cultivar o fungo C. fimbriata para produção da enzima β-xilosidase, purificar, determinar sua massa molecular e tentar comprovar sua identidade. O fungo foi cultivado por 168 h em meio mínimo mineral contendo farelo de trigo como fonte de carbono. Após este período, o meio foi filtrado, centrifugado e utilizado como fonte de β-xilosidases. A enzima foi purificada por cromatografia de troca iônica, ultrafiltração, e eletroforese em gel de poliacrilamida, obtendo 5 bandas no total. Para determinação da banda correspondente à enzima, fez-se um zimograma com o substrato sintético ρNPβxil. Logo após, a banda correspondente a β-xilosidase foi submetida a uma etapa de tripsinização em gel e posterior fragmentação em espectômetro de massa MALDI TOF/TOF com análise no MASCOT para busca referente a proteínas de fungos na base de dados do NCBI. Em todas as etapas foram realizadas atividades enzimáticas com ρNPβxil para verificação da presença da enzima. Observou-se que as etapas de purificação foram eficientes por se obter a enzima purificada, sem grande perda de sua atividade, sendo a massa molecular desta, estimada em 161 kDa pela eletroforese em gel. Na análise por espectometria, obteve-se baixa similaridade com a proteína hipotética PANT_20d0003 da levedura Pseudozyma antarctica T-34. Entretanto não há dados disponíveis nos bancos de dados referentes a enzimas de C. fimbriata, comprometendo esta análise. Os resultados indicam que a enzima é uma β-xilosidase e novos experimentos devem ser realizados para o estudo das aplicações biotecnológicas desta enzima.

As β-xilosidases catalisam a hidrólise de xigooligossacarídeos através da remoção de unidades xilosil em sua região não redutora. Estas são enzimas de interesse biotecnológico, principalmente para produção do álcool combustível. Ceratocystis fimbriata é um fungo fitopatogênico causador doenças em diversas culturas. O objetivo deste trabalho foi cultivar o fungo C. fimbriata para produção da enzima β-xilosidase, purificar, determinar sua massa molecular e tentar comprovar sua identidade. O fungo foi cultivado por 168 h em meio mínimo mineral contendo farelo de trigo como fonte de carbono. Após este período, o meio foi filtrado, centrifugado e utilizado como fonte de β-xilosidases. A enzima foi purificada por cromatografia de troca iônica, ultrafiltração, e eletroforese em gel de poliacrilamida, obtendo 5 bandas no total. Para determinação da banda correspondente à enzima, fez-se um zimograma com o substrato sintético ρNPβxil. Logo após, a banda correspondente a β-xilosidase foi submetida a uma etapa de tripsinização em gel e posterior fragmentação em espectômetro de massa MALDI TOF/TOF com análise no MASCOT para busca referente a proteínas de fungos na base de dados do NCBI. Em todas as etapas foram realizadas atividades enzimáticas com ρNPβxil para verificação da presença da enzima. Observou-se que as etapas de purificação foram eficientes por se obter a enzima purificada, sem grande perda de sua atividade, sendo a massa molecular desta, estimada em 161 kDa pela eletroforese em gel. Na análise por espectometria, obteve-se baixa similaridade com a proteína hipotética PANT_20d0003 da levedura Pseudozyma antarctica T-34. Entretanto não há dados disponíveis nos bancos de dados referentes a enzimas de C. fimbriata, comprometendo esta análise. Os resultados indicam que a enzima é uma β-xilosidase e novos experimentos devem ser realizados para o estudo das aplicações biotecnológicas desta enzima.

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/biochem-jaibqi-0036

Como citar:

Marcele Martins; "PRODUÇÃO E PURIFICAÇÃO DE UMA β-XILOSIDADE DO FUNGO CERATOCYSTIS FIMBRIATA", p-13-14. In: Anais da V Jornada Acadêmica Internacional de Bioquímica [= Blucher Biochemistry Proceedings, v.1, n.1]. São Paulo: Blucher, 2015.
ISSN 23595043, DOI 10.5151/biochem-jaibqi-0036