Fevereiro 2015 vol. 1 num. 2 - XX Congresso Brasileiro de Engenharia Química

Artigo - Open Access.

Idioma principal

PURIFICAÇÃO DE FRAGMENTOS Fab POR IMAC EM AGAROSE-CM-Asp-Co(II)

MOURÃO, C. A. ; BUENO, S. M. A. ;

Artigo:

As imunoglobulinas G (IgG) e seus fragmentos Fab, F(ab)’2 e Fv apresentam aplicações relevantes na área médica e de diagnóstico. O elevado custo de purificação dessas biomoléculas por técnicas de afinidade justifica a investigação de alternativas de baixo custo para a sua purificação. O objetivo deste trabalho é avaliar a eficácia do quelato CM-Asp-Co(II) imobilizado em agarose na purificação dos fragmentos Fab de IgG humana, a partir de uma solução de IgG clivada pela enzima papaína. O efeito do sistema tamponante e do cloreto de sódio foram avaliados. O tampão Hepes na ausência de sal, permitiu obter os fragmentos Fab com pureza superior a 90%. Esse tampão possibilitou a maior recuperação seletiva dos fragmentos, em comparação com o tampão Hepes contendo NaCl e com os tampões, Tris-HCl e fosfato de sódio. Os resultados evidenciaram a potencialidade desse ligante para purificação de fragmentos Fab.

Artigo:

Download (PDF)

Palavras-chave:

DOI: 10.5151/chemeng-cobeq2014-1083-21161-143063

Referências bibliográficas
  • [1] AYYAR, B. V.; ARORA, S.; MURPHY, C., O''KENNEDY, R. Affinity chromatography as a tool for antibody purification. Methods, v. 56, p. 116-129, 2012.
  • [2] BRADFORD, M. M. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem., v. 72, p. 248-254, 1976.
  • [3] CHAMES, P.; VAN REGENMORTEL, M.; WEISS, E.; BATY, D. Therapeutic antibodies: successes, limitations and hopes for the future. Br. J. Pharmacol., v. 157, p. 220-233, 2009.
  • [4] COLEMAN, L.; MAHLER, S. M. Purification of Fab fragments from a monoclonal antibody papain digest by Gradiflow electrophoresis. Protein Expres. Purif., v. 32, p. 246-251, 2003.
  • [5] GABERC-POREKAR, V.; MENART, V. Perspectives of immobilized-metal affinity chromatography. J. Biochem. Bioph. Methods, v. 49, p. 335-360, 2001.
  • [6] HANSEL, T. T.; KROPSHOFER, H.; SINGER, T.; MITCHELL, J. A.; GEORGE, A. J. T. The safety and side effects of monoclonal antibodies. Nat. Rev. Drug Discovery, v. 9, p. 325-338, 2010.
  • [7] HOLLIGER, P.; HUDSON, P.J. Engineered antibody fragments and the rise of single domains. Nat. Biotechnol., v. 23, p. 1126-1136, 2005.
  • [8] HUSE, K.; BOHME, H. J.; SCHOLZ, G. H. Purification of antibodies by affinity chromatography. J. Biochem. Bioph. Methods, v. 51, p. 217-231, 2002.
  • [9] KHOURY G. E.; LOWE C. R. A biomimetic Protein G affinity adsorbent: an Ugi ligand for immunoglobulins and Fab fragments based on the third IgG-binding domain of Protein G. J. Mol. Recognit., v. 26, p. 190-200, 2013.
  • [10] LAEMMLI, U. K. Cleavage of Structural Proteins during Assembly of Head of Bacteriophage-T4.
  • [11] Nature, v. 227, p. 680-685, 1970.
  • [12] LU, X. S.; MILLER, C. J. Concentration of IgG in the sera of normal Rhesus macaques as determined by a species-specific radial immunodiffusion assay. J. Immunol. Methods, v. 197, p. 193-196, 1996.
  • [13] Área temática: Processos Biotecnológicos 7MANTOVAARA, T.; PERTOFT, H.; PORATH, J. Carboxymethylated aspartic acid agarose, a selective adsorbent for calcium-binding proteins, preliminary studies. Biotechnol. Appl. Biochem., v. 13, p. 315-322, 1991.
  • [14] PORATH, J. Immobilized Metal-Ion Affinity-Chromatography. Protein. Expres. Purif., v. 3, p. 263-281, 1992.
  • [15] PORATH, J.; CARLSSON, J.; OLSSON, I.; BELFRAGE, G. Metal chelate affinity chromatography, a new approach to protein fractionation. Nature, v. 258, p. 598-599, 1975.
  • [16] PORATH, J.; OLIN, B. Immobilized metal ion affinity adsorption and immobilized metal ion affinity chromatography of biomaterials. Serum protein affinities for gel immobilized iron and nickel ions. Biochemistry, v. 22, p. 1621-1630, 1983.
  • [17] BRESOLIN, I. T. L.; BORSOI-RIBEIRO, M.; CARO, J. R.; DOS SANTOS, F. P.; DE CASTRO, M. P.; BUENO, S. M. A. Adsorption of human serum proteins onto TREN-agarose: Purification of human IgG by negative chromatography. J. Chromatogr. B, v. 877, p. 17-23, 2009.
  • [18] TERNYNCK, T.; AVRAMEAS, S. Techniques Immunoenzymatiques. Paris: Editora Inserm, 1987.
  • [19] TODOROVA-BALVAY, D.; PITIOT, O.; BOURHIM, M.; SRIKRISHNAN, T.; VIJAYALAKSHMI, M. Immobilized metal-ion affinity chromatography of human antibodies and their proteolytic fragments. J. Chromatogr. B, v. 808, p. 57-62, 2004.
  • [20] TOWBIN, H.; STAEHELI, T.; GORDON, J. Electrophorectic transfer of proteins form polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci., v. 76, p. 4350-4354, 1979.
  • [21] XIANG, H.; WYNN, R.; NGUYEN, L. T.; ROSS, O. H.; AHRENS, D. P.; O`NEIL, K. T.; HOLLIS, G. F.; PATRICK, D. R. Immobilized metal-ion affinity chromatography of recombinant Fab protein OPG C11 in the presence of EDTA-Mg(II). J. Chromatogr. A, v. 978, p. 153-164, 2002.
  • [22] YU, D. Q.; GHOSH, R. Membrane bioreactor separator system for integrated IgG fragmentation and Fab purification. J. Immunol. Methods, v. 359, p. 37-41, 2010.
  • [23] ZACHARIOU, M.; HEARN, M. T. W. Adsorption and selectivity characteristics of several human serum proteins with immobilised hard Lewis metal ion-chelate adsorbents. J. Chromatogr. A, v. 890, p. 95-116, 2000.
  • [24] ZHAO, Y. H.; GUTSHALL, L.; JIANG, H. Y.; BAKER, A.; BEIL, E.; OBMOLOVA, G.; CARTON, J.; TAUDTE, S.; AMEGADZIE, B. Two routes for production and purification of Fab fragments in biopharmaceutical discovery research: Papain digestion of mAb and transient expression in mammalian cells. Protein Expres. Purif., v. 67, p. 182-189, 2009.
Como citar:

MOURÃO, C. A.; BUENO, S. M. A.; "PURIFICAÇÃO DE FRAGMENTOS Fab POR IMAC EM AGAROSE-CM-Asp-Co(II)", p. 1507-1514 . In: Anais do XX Congresso Brasileiro de Engenharia Química - COBEQ 2014 [= Blucher Chemical Engineering Proceedings, v.1, n.2]. São Paulo: Blucher, 2015.
ISSN 2359-1757, DOI 10.5151/chemeng-cobeq2014-1083-21161-143063

últimos 30 dias | último ano | desde a publicação


downloads


visualizações


indexações