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Com enormes preocupações relacionadas aos combustíveis fósseis, tanto em caráter de futura escassez quanto ambiental, o biodiesel, por ser biodegradável e renovável, prova-se uma alternativa interessante para suprir essa demanda energética. Dentre os processos para sua obtenção, o mais consolidado, conhecido como rota química, resume-se na transesterificação entre óleos e álcoois, gerando glicerol e biodiesel, na presença de catalisadores básicos, e dentre suas desvantagens, cita-se a necessidade de pré-tratamento de acidez da matéria-prima e do pH dos efluentes para descarte, reação com alta demanda de álcool e ausência total de água, dificuldade de recuperação do glicerol, altas temperaturas de operação e corrosão do sistema de operação. Por estas razões, a hidroesterificação catalisada por enzimas, consistindo na hidrólise de óleos com água, formando glicerol, água e ácidos graxos livres, em sequência da esterificação deste último com álcoois, formando água e biodiesel, é uma rota candidata ao aperfeiçoamento da produção de biodiesel, pois opera em condições moderadas de temperatura, não necessita de pré-tratamento de acidez da matéria prima, e o glicerol produzido é mais puro e de mais fácil recuperação. Este trabalho descreve o perfil de conversão da hidrólise de óleo de soja degomado catalisada por lipase de Pseudomonas fluorescens (LPF) livre, e a avaliação do reuso da água e lipase em sucessivas hidrólises realizadas no tempo de máxima conversão.